肝的活检是诊断脂肪肝的金标准。提倡在B超的引导下进行肝穿刺，以提高穿刺准确性，最大限度地减少肝脏损伤。但因其创伤性，有一定的危险性，较难为病者接受。
对脂肪肝的检查分为实验室以及其他辅助检查。
1.血清脂质分析
中性脂肪、总胆固醇、游离脂肪酸等均可升高，尤其是中性脂肪(三酰甘油)升高，最有诊断价值。约54%病例胆固醇升高，但血清胆固醇浓度与肝组织活检肝内脂肪量无关。
2.肝功能检查
轻度脂肪肝，肝功能基本正常。中、重度脂肪肝，表现为ALT、AST中、轻度升高，罕见高度升高。一般肥胖性脂肪肝ALT高于AST，反之，酒精性脂肪肝AST高于ALT;血清胆红素异常;80%以上血清胆碱酶升高。
3.肝脏B超检查
肝脏B超检查，具有经济、迅速、准确、无创伤等优点，目前列为脂肪肝首选检查方法。
弥漫性脂肪肝B超表现：肝实质近场呈点状高回声，且肝回声强度大于脾肾回声，称为“亮肝”;肝远场回声衰减;肝内血管显示不清或纤细。
局限性脂肪肝B超表现：肝内强回声实质性，出现边缘清晰的弱回声区，呈类圆形或斑片状，但无肿块效应，无血管绕行或中断，甚至或可见门静脉正常延伸入该区。局限性脂肪肝易误诊为肝内肿瘤。
4.CT和MRI
CT对诊断脂肪肝的准确性高于B超，对脂肪肝有诊断、分型、量化及鉴别论断的意义。尤其对局限性脂肪肝，能更清楚地与肝癌、肝血管瘤、肝脓肿等相鉴别。但其价格较高，而MRI价格较CT更昂贵，对脂肪肝的诊断优势不明显。
CT和MRI表现：在CT上脂肪肝所累及部位的密度变低，常接近于水或低于水的密度。正常人肝脏CT密度一般高于脾脏，一旦肝脏CT值低于脾脏，则可认定肝脏CT值较低。脂肪浸润肝脏可见清晰肝血管影，呈“枯树枝状”，增强后血管影更清楚。弥漫性脂肪肝者，一般较为均匀。局限性脂肪肝多见于肝右叶，尤以后段多见，病变区肝较饱满，密谋不均匀减低，边界模糊不清;增强后病变区密度不均匀增强，其中可见血管影。
5.肝活检
肝的活检是诊断脂肪肝的金标准。提倡在B超的引导下进行肝穿刺，以提高穿刺准确性，最大限度地减少肝脏损伤。但因其创伤性，有一定的危险性，较难为病者接受。目前多作鉴别诊断之用。脂肪肝活检标本可见：镜下可见肝细胞脂肪浸润，脂肪球大者可将细胞核推向一边，整个肝细胞裂可形成脂肪囊肿。肝细胞坏死及炎症反应轻微或无。
在做肝穿刺的时候必须注意的是，虽然肝穿刺危险性不大，但肝脏毕竟是一种重要器官，必须严格掌握适应证与禁忌证。尤其下列情况作为肝活检的标忌证：重度黄疸，大量腹水和有凝血机能障碍者;充血性肝肿大;右侧胸腔及膈下有急性炎症者;疑有肝包虫病或肝血管瘤者
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